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Fig.Von Kossa staining of Aortic vessels in model rat
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产品包装(模拟)
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产品包装(模拟)
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通过ISO 9001、ISO 13485质量体系认证
血管钙化(VC)大鼠模型
Rat Model for Vascular Calcification (VC)
- 编号DSI845Ra01
- 物种Rattus norvegicus (Rat，大鼠)
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- 规格 每例
- 价格 ¥ 1560
- 原型物种Human
- 来源维生素D3(Vitamin D3) 导致
- 模式动物品系SPF级SD大鼠，健康，6~8W，雄性，体重180g-200g
- 实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组
- 实验周期8 weeks
- 建模方法血管钙化动物模型
每日维生素D3(Vitamin D3) 30万IU/kg体重肌肉注射，连续四周；
每日尼古丁灌胃两次：将尼古丁溶于花生油灌胃（25mg/kg），9h后再灌胃1次，连续四周。
注意事项：
维生素D3主要造成血管钙化，尼古丁刺激心跳加速血压升高每次灌胃完都要观察动物状态，老鼠灌胃后会抽搐，需要人工按压给缓解。
血浆制备：模型制备结束，各组大鼠用戊巴比妥钠深度麻醉大鼠，腹主动脉取血，注入含7.5%EDTA 二钠30ul、40ul 和抑肽酶40ul 的试管中，离心分离血浆。-20℃保存待测。
组织制备：各组大鼠取血后处死，取大鼠胸主动脉段，置入4%多聚甲醛固定液中，脱水，石蜡包埋，切片，备用
病理组织进行Von Kossa染色。 - 应用疾病模型
1.血管钙含量测定: 取10mg腹主动脉溶于硝酸消化、烤干，用含有
27nmol/LKCl和 27μmol/L LaCl3的去离子水复溶，用原子分光光度计在442.7nm
处读取吸光度，后换算成组织钙含量(以μmol/gdw 表示)
2.ALP活性测定：取腹主动脉匀浆，8000×g离心10 min，取上清液。考马
斯亮蓝法蛋白定量。按试剂盒说明方法测定血管组织ALP活性，紫外分光光度计
在405nm处读取吸光度。具体步骤：加入缓冲液，370C孵育30min，NaOH终止反应，测定405nm下的吸收值。ALP活性用p2硝基苯酚为标准值计算，1单位表示30min内产生1nM硝基酚的活性。BCA法测定总蛋白定量，校正ALP活性。
病理组织Von Kossa染色:
取大鼠胸主动脉段，用石蜡包埋胸主动脉后切片，４μｍ厚切片，常规脱蜡、脱水。1%硝酸银溶液浸泡，日光下照射30min后，将玻片浸入5%硫代硫酸钠溶液1min，后用碱性品红返染。脱水、透明、封片，用光镜观察。
主动脉钙化面积百分比测算：取主动脉弓至胸主动脉段血管1cm，沿纵
轴剪开后Von Kossa 染色，用Image-Pro Plus 6.0 病理图像分析软件计算各实验
组大鼠钙化斑块面积百分比。
免疫组化法观察RUNX2、BMP2、RANK/RANKL/OPG水平：DAB显
色，苏木素复染，常规梯度乙醇脱水，中性树胶封片观察。阴性对照以PBS代替一抗进行染色。每只大鼠随机取3张结肠切片，每张切片光学显微镜下随机选取5个高倍视野，统计每个视野中阳性组织细胞的积分光密度值(IOD值)与检测面积的比值，即平均光密度值(MOD)，以代表染色强度。
Western blot 检测RUNX2、BMP2、RANK/RANKL/OPG 蛋白表达
应用SPSS软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x ±ｓ）表示，采用ｔ检验，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示有显
